國內這位科學家的新基因編輯技術，為何被多個國家科學家質疑？

澎湃新聞見習記者 王盈穎

韓春雨

河北科技大學副教授韓春雨震驚全球學術界的新基因編輯技術NgAgo-gDNA，正遭遇越來越多的質疑。從5月2日他的論文發布在《自然-生物技術》網路版之後，到現在為止，全球仍沒有一家實驗室對外宣布，能夠完全成功重複韓春雨的實驗。現在已有多國科學家要求《自然-生物技術》介入調查，並公開韓春雨實驗中的所有原始數據和實驗條件。

北京時間7月29日，一度支持韓春雨的澳大利亞國立大學的基因學家Gaetan Burgio，反戈一擊。他在Twitter上發布長文《我的NgAgo經歷》，否認了自己7月15日之前部分重複實驗時得出的結論，表示並無嚴格意義上的證據顯示韓春雨的NgAgo-gDNA技術有基因編輯的跡象，並且要求韓春雨公開所有原始數據和實驗條件。

韓春雨的NgAgo-gDNA技術，挑戰的是最為流行的基因編輯技術CRISPR-CAS9，論文剛一發表，就引發了轟動。基因編輯技術是指能夠讓人類對目標基因進行「編輯」，實現對特定DNA片段的敲除、加入等。目前CRISPR-CAS9是最為普遍的基因編輯技術，被稱為「基因魔剪」。 5月2日，韓春雨課題組的論文《DNA-guided genome editing using the Natronobacterium gregoryi Argonaute》在《Nature Biotechnology》在線發表。繞開時興的CRISPR-CAS9技術，課題組利用格氏嗜鹽鹼桿菌（Natronobacterium gregoryi）的Argonaute核酸內切酶，以DNA為介導進行基因組編輯，簡稱NgAgo-gDNA。

質疑韓春雨的Gaetan Burgio在7月29日發布的長文中介紹了重複實驗的具體過程操作和結論，附帶了7張實驗結果圖。

受精卵原核注射NgAgo之後，基於囊胚的PCR結果。

對NgAgo注射過的受精卵PCR產物的T7核酸內切酶檢測。

當用高濃度5 磷酸化的ssDNA(25納克/微升)和NgAgo原核注射小鼠受精卵之後基於囊胚的PCR和電泳凝膠。

對小鼠囊胚進行NgAgo、5』磷酸化ssDNA原核共注射之後獲得囊胚，進行DNA提取、PCR擴增和測序之後的一個典型測序結果。

微注射NgAgo的小鼠受精卵凝膠電泳。

代表性的所有電泳膠的序列的Clustal比對。Ank-1作為參考序列。

一個代表性測序色譜圖(使用反向引物測序)。

他表示：在多番嘗試、試驗3個不同的細胞後，沒有發現嚴格意義上證明NgAgo發生基因編輯的證據；在他看來，NgAgo酶需要加熱到50攝氏度才能有效，對37攝氏度下NgAgo內切酶的活性表示質疑。

在長文中，Gaetan Burgio表示，「《自然生物技術》期刊應該要求韓春雨公開所有的原始數據和實驗條件」，並認為：「NgAgo的未來並不明朗。」

Gaetan Burgio選擇了小鼠受精卵進行重複實驗。因為他長期研究小鼠細胞，較為熟悉，並在兩年半前，用小鼠細胞，完成了他的首次CRISPR-Cas9基因編輯。由於韓春雨的論文中使用的是人體細胞，嚴格意義上來說，Gaetan Burgio和韓春雨所做的不是同一個實驗。但由於小鼠和人體結構相似，一般認為人體細胞能完成的實驗也能在小鼠細胞上進行。

在Gaetan Burgio發文後不久，來自西班牙高等科學委員會（CSIC）下設的國立生物技術中心（Centro Nacional de Biotecnologia）的科學家Lluis Montoliu轉發了該文，並在Twitter上寫道：「CRISPR萬歲！！！CRISPR-Cas9系統會用上數百億萬年而不衰。難以擊垮。」

據公開資料顯示，2015年，Lluis Montoliu從非營利組織「國際轉基因技術協會」（The International Society for Transgenic Technologies）卸任主席之位。他的Twitter簡介顯示，Lluis Montoliu的研究方向是哺乳動物的基因組，以及基於轉基因動物研究人類的罕見疾病。

Lluis Montoliu在Twitter上透露，在NgAgo之前，他們曾用大約2年時間，試圖測試Ago家族中來自Thermus thermophiles嗜熱棲熱菌的酶TtAgo，但同樣失敗。

隨後，7月30日，Lluis Montoliu更新博文稱，他已經停止了所有關於NgAgo的項目，同時「建議所有想做這件事人不要再浪費資源」。

圖片顯示，發件方為代表Lluis Montoliu的「國際轉基因技術協會」，郵件名為「對Ago的巨大失望：CRISPR萬歲！」，發送時間為當地時間7月29日上午9點49分。郵件用加粗字體寫道：「（目前最重要的信息是）NgAgo在哺乳動物細胞的基因編輯中不起作用」、「我建議所有人放棄涉及NgAgo的項目」。

方舟子所貼的郵件截圖。

但Lluis Montoliu及其所處的「國際轉基因技術協會」的言論，引發了部分國內科學家的不滿，其中包括中國科學院上海神經科學研究所研究員仇子龍。7月30日晚上，他在實名認證的微博上質疑「國際轉基因技術協會」和Lluis Montoliu在領域內的專業性。

仇子龍發文質疑「國際轉基因技術協會」和Lluis Montoliu在領域內的專業性。

此前，仇子龍被傳出重複實驗成功。7月20日，科學網有博文稱仇子龍成功重複韓春雨的實驗。但仇子龍本人在7月21日作出回應，表示實驗室仍在重複，優化各種條件，目前的實驗結果距離韓春雨論文中的結果「相差甚遠」，並呼籲韓春雨提供「可重複NBT發表文章的NgAgo，或者優化的Ngago2.0，smart版本等等」。

對NgAgo的質疑聲自6月下旬開始就陸陸續續，韓春雨本人在百度貼吧上做出過一些回應。

6月28日，他在對網友的回復中表示，新系統剛出來都會「不好使」，他也認同目前NgAgo系統不夠穩定，等2.0版本出來會找專門機構免費發放。

7月2日，在貼有方舟子質疑原文的帖子中，韓春雨進行了較為詳細的回應，強調NgAgo系統對污染特別敏感，實驗時不要有寄生菌和支原體的污染，並對實驗環節做出技術性的建議。

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