利用CRISPR技術需要注意哪些關鍵點

2017年6月23-25日 周五-周日

南京

（理論與實驗相結合）

趙慶順

南京大學模式動物研究所 遺傳學與發育生物學教授

學士（1983-1987年，南京大學）、碩士（1987-1990年，南京大學）、

博士（1996-2001，普渡大學）

2001-2003年在杜克大學醫學中心進行博士後訓練

2003年全職加入南京大學模式動物研究，2006年晉陞為教授

趙教授CRISPR/Cas9技術方面已有很豐富的經驗，長期為學員傳授CRISPR/Cas9技術

往期學員評價

評價一：CRISPR/Cas9系統是一種新興的基因定點編輯技術，越來越被研究者所關注。在趙慶順教授理論結合實際、幽默接地氣的授課方式下，為期兩天半的培訓輕鬆且充實，讓我從對 CRISPR/Cas9技術的毫無所知，到對該技術原理及應用有了的全面認識；同時，結合開展的實驗環節，掌握了 CRISPR 序列的設計，基因組編輯工具的製備及向細胞內遞送的方法；熟悉了利用 CRISPR 技術在動植物中敲入和敲除的過程；了解了 CRISPR/Cas9脫靶問題解決方案。通過本次學習，受益匪淺！

評價二：有幸全程聆聽趙教授的課，教授授課邏輯性非常強、條理清晰、講解生動細緻、內容豐富。教授知識面很廣、知無不答言無不盡，絕對是個專業的研究學者。特別是對哪些技巧和注意哪些關鍵點講的非常實用。比較適合從事動物植物細菌等微生物研究人員來學習。課程安排合理，由淺入深，適合不同人群，希望這個班能讓更多的科研人員獲益。

評價三：我是2016年在上海參加過趙教授的學習班，因我基礎比較差，在實際應用過程中遇到了很多的問題，非常感謝南京堯順禹生物科技有限公司工作人用耐心細緻的課後服務。2017年2月主辦單位上海瑋瑜生物科技有限公司謝老師告知我老學員可以終身免費繼續學習，我又去了一次南京。真是每一次都有不同的收穫，感謝感謝再感謝，也祝瑋瑜公司越辦越好。

會議大樓培訓現場實驗現場

本期課程安排

第一天上午9:00-12:00

第一講、基因組靶向修飾技術簡介

1、基因功能研究的分子遺傳學技術簡介

2、基於 NHEJ 修復的基因敲除和基於HR修復的基因敲入

3、ZFN 和 TALEN 技術

4、CRISPR/Cas9技術

第二講、CRISPR 的設計

1、目標基因結構及功能的生物信息學分析

2、CRISPR 的設計原則

3、CRISPR 的在線設計（可自帶可無線上網之筆記本電腦或手機）

4、靶向編輯基因的基因型確認及 CRISPR 的再設計

第一天下午13:00-17:00

第三講、基因組編輯工具的製備及向細胞內的遞送策略

1、基因組編輯工具之 DNA 表達元件的製備與遞送策略

2、基因組編輯工具轉錄產物製備及遞送策略

3、基因編輯工具 RNP 的製備與遞送策略

實驗（或技術細節答疑）一： CRISPR/Cas9 基因組編輯工具 All-in-One 表達質粒的構建（1）

1、CRISPR 模板引物的準備

2、CRISPR 模板的製備

3、退火 CRISPR 模板與線性化 CRISPR/Cas9 All-in-One 載體的重組

4、大腸桿菌的轉化

5、攜帶基因組編輯工具的轉化子的塗板培養

第二天上午9:00-12:00

第四講、sgRNA 活性驗證

1、體外法 2、體內法 2.1 插入缺失（Indel）突變檢測的基本策略 2.2 基於胚胎反應器的活性驗證方法 2.3 基於細胞系的活性驗證方法

實驗（或技術細節答疑）二：CRISPR/Cas9 基因組編輯工具All-in-One表達質粒的構建（2）

基因組編輯工具之CRISPR/Cas9 All-in-One重組子的快速驗證法（PCR法）

實驗（或技術細節答疑）三：基因組編輯子等位基因的基因型鑒定

1、基因組DNA模板製備

2、目標基因的基因組DNA片段的PCR擴增

第二天下午13:00-17:00

第五講、利用CRISPR技術創建基因組編輯人及動物細胞系

1、創建基因組編輯細胞系的基本過程

2、基因敲入的供體DNA的設計原則及基因敲入供體設計實例

3、表達CRISPR的All-in-One表達質粒（和供體）導入細胞系的方法

4、陽性細胞克隆篩選

5、靶向突變的基因型鑒定及基因組編輯細胞系的建立

6、敲入基因和敲除基因（無效等位基因）的確認

7、建立基因組編輯細胞系的優選策略

第六講、利用CRISPR技術創建基因敲除或敲入動物

1、創建基因組編輯動物突變體的基本過程

2、sgRNA/Cas9 mRNA（和供體）共顯微注射入受精卵中建立初建者

3、初建者體細胞攜帶靶向突變等位基因的確認

4、基因敲除/敲入動物（F1）的鑒定

5、基因敲除/敲入動物品系（F2）的建立

6、敲除/敲入基因的確認

7、建立基因敲除或敲入突變體動物的優選策略

第七講、利用CRISPR技術創建基因敲除或敲入植物

1、創建基因組編輯植物突變體的基本過程

2、雙元載體的轉染

3、基因敲除/敲入植物（F1）鑒定

實驗（或技術細節答疑）四：實驗結果的點評與討論

1、CRISPR/Cas9 All-in-One重組子的PCR產物電泳檢測結果點評

2、基因組編輯等位基因的基因型鑒定電泳檢測結果的點評

3、測序是驗證基因組編輯結果的金標準

第三天上午9:00-12:00（12:00以後課程結束）

第八講、基因組編輯技術的脫靶問題

1、脫靶的產生原因

2、脫靶檢測

3、解決脫靶問題的方法

4、脫靶問題對不同領域研究者的意義

第九講、利用CRISPRi或CRISPRa技術調控基因在細胞中的表達

1、dCas9的特徵簡介

2、運用CRISPR技術調控基因在細胞中表達的基本實驗過程

3、CRISPR技術的轉錄抑制

4、CRISPR技術的轉錄活化

第十講、CRISPR技術的倫理學問題

1、 新型基因組編輯技術的發展（鹼基編輯）

2、基因組編輯技術的應用

3、基因組編輯技術對未來社會的革命性的影響

4、基因組編輯技術的倫理學問題

【主辦單位】

上海瑋瑜生物科技有限公司

【時間地點】

2017年6月23-25日 南京市 江北新區 浦口經濟開發區低碳谷

【住 宿】

為了便於接送、統一指定南京龍華大酒店，住宿自理

標準間（含早）280元/人 合住140元/人 南京浦口區江浦街道龍華路2號近南京工業大學浦口校區

【收費標準】

3300元/人 (不含住宿費) 授課期間發放紙質邀請函（蓋章） 按交費先後順序確定名額及座位，註冊費包含教材、午餐等費用。

【付款方式】

1，轉賬或支付寶：

A：銀行轉賬

開 戶 行：上海銀行桃浦支行

B：支付寶轉賬

2，現場刷卡或現金（支持刷公務卡）

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