WB的灰度值計算，你都會了嗎？

當我們處理細胞之後，想看一下該處理對細胞中某一基因表達的影響，我們需要從蛋白水平來看一下該基因表達的蛋白的量的變化，那我們通常會做western blot，對蛋白進行半定量，通過對western blot結果的分析，我們可以知道該處理對基因的表達造成了什麼影響。那我們做了western blot，掃膜得到結果之後就萬事大吉了嗎？

我想說這只是剛開始罷了，這時候我們得到的只是蛋白的條帶，當然我們通過觀察處理前後條帶的深淺可以大概的判斷該處理對基因的表達造成了什麼影響。

但是這種判斷是存在誤差的，誤差來源於我們上樣的時候並不能保證每個加樣孔的上樣量都一樣，所以我們不能只通過觀察條帶的深淺來判斷該處理對基因的表達造成了什麼影響。

我們接下來要做的就是對條帶的灰度值進行計算並做統計，這樣得到的結果才更加準確更有說服力。接下來我們就來談談如何利用Image J來計算條帶的灰度值：

1、File——》open 打開WB片子

2、把圖片轉化成灰度圖片 ：image——》type——》8-bit

3、消除背景影響：process——》subtract background 選擇50基本可以。

4、選中矩形選項，圈中第一個條帶，然後ctrl+1，然後將第一個條帶上的矩形移動到第二個條帶上 ，ctrl+2，然後到第三個條帶，ctrl+2，直到最後一個條帶，把所有條帶都圈中之後，然後ctrl+3。

5、選中直線工具，將開口的波峰關閉。

6、選中魔棒工具，點擊波峰可以顯示波峰下面積，即條帶的灰度值。

7、result——》file——》save，打開保存的result，進行統計分析：以內參為基數，其他數值與其比值為相對灰度值。

8、整理之後的結果為

計算出灰度值並統計分析，經整理後得到的結果圖是不是感覺上升了一個檔次呢，而且最主要的是這樣得到的結果更精確更有說服力!

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