實驗小站：慢病毒系列（三）慢病毒常見問題匯總

實驗小站慢病毒系列（三）

慢病毒常見問題匯總

常用術語

病毒感染複數（MOI）：

傳統的MOI概念起源於噬菌體感染細菌的研究。其含義是感染時噬菌體與細菌的數量比值，也就是平均每個細菌感染噬菌體的數量。噬菌體的數量單位為pfu。

一般認為MOI是一個比值，沒有單位，其實其隱含的單位是pfu number/cell。後來MOI被普遍用於病毒感染細胞的研究中，含義是感染時病毒與細胞數量的比值，以下提到的MOI都是沿用這個概念。然而，由於病毒的數量單位有不同的表示方式，從而使MOI產生了不同的含義。能產生細胞裂解效應的病毒例如單純皰疹病毒等習慣上仍用pfu表示病毒數量，因此其MOI的含義與傳統的概念相同。

MOI=病毒滴度×體積/細胞數量

病毒的滴度（BT）：

指單位體積液體中有感染能力的病毒或噬菌體數目。滴度是一個病毒自身複製的數量概念，有很多名詞都用來描述病毒溶液的滴度，

1）VP(病毒顆粒)或OPV（光學顆粒單位）

2）GTU（基因轉移單位）或轉導顆粒（BFU即藍點形成單位，與GTU類似）

3）PFU（空斑形成單位）

4）TCID50（50%組織培養感染劑量）

慢病毒技術中，病毒顆粒滴度（BT=TU/ml，transducing units）

常用慢病毒滴度檢測方法

常見問題解答

Q.目前存在許多病毒載體系統，包括：腺病毒、逆轉錄病毒和慢病毒，針對我的實驗應該使用哪個系統?

腺病毒：針對大多數細胞有幾乎100%的感染效率，包括分裂和不分裂細胞及原代細胞，不整合到宿主細胞。但是構建和包裝的操作相對複雜。

逆轉錄病毒：對於大多數細胞的感染效率

慢病毒：對於分裂細胞和非分裂細胞能夠達到30%的感染效率。和逆轉錄病毒一樣存在整合到宿主細胞基因組上的風險，以致引起基因突變、致癌。並且構建和包裝相對簡單。

目前腺病毒系統是最好的一種對於所有細胞將外源基因及siRNA導入細胞的有效途徑。但是，如果是針對個別細胞的研究的話，逆轉錄病毒、慢病毒甚至直接將帶有目的基因的表達質粒轉染細胞即可。

Q.病毒是否可以重新凍融？

病毒可以凍融，但是反覆多次的凍融會降低病毒的滴度。

Q.如何使用慢病毒感染細胞？

使用慢病毒感染細胞的操作流程取決於細胞種類，因此首先要了解細胞的來源和背景。通常來講首先要根據準確的MOI和需要感染細胞量計算所需要的病毒量，然後將所需病毒液加入培養體系後4小時左右即可換成完全培養基正常培養。

Q.如何確定慢病毒感染靶細胞的感染效率？

慢病毒感染靶細胞的感染效率可以通過qPCR檢測靶細胞中的慢病毒載體拷貝數來測算。另外如果構建的慢病毒載體帶有標記基因（如GFP、RFP等）則可以通過FACS檢測陽性細胞的比例來評估感染效率。

Q.慢病毒感染靶細胞後，目的基因的表達是瞬時表達還是穩定表達？

慢病毒感染靶細胞後，目的基因或者干擾序列被整合到細胞的染色體DNA；並且隨靶細胞的增殖分化，目的基因或者干擾序列也隨靶基因DNA的一起複制並遺傳到子代細胞中。

Q.是否可以直接從慢病毒顆粒中提取慢病毒載體？

不可以，慢病毒載體用於轉染包裝細胞後生產病毒，包裝好的病毒顆粒只含有載體中5』 and 3』 LTR』s 的RNA。

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