分子生物學檢驗

分子生物學檢驗（血液病融合基因檢測）

一、標本採集

抽取新鮮血液或骨髓液3-5毫升，EDTA抗凝（或者置於EDTA抗凝管中，顛倒混勻），迅速置於-20度冰箱冷凍保存（或者乾冰盒中保存），12小時內送檢。

常見細胞染色體及融合基因的異常表達

t（9，22）——BCR-ABL，常見於CML*及前B-ALL；

t（1，19）——PBX-E2α，常見於前B-ALL

t（15，17）——PML-RARα，常見於AML-M3*

t（4，11）——MLL-AF4，常見於前B-ALL

t（9，11)——HRX-AF9，常見於AML-M4、M5；ALL

t（6，9）——DEK-CAN，常見於AML-M2

t（12，21）——TEL-AML1，常見於前B-ALL

t（3，5）——NPM-MLF1，常見於AML-M6

t（11，14）——TTG2-TCRα/δ，常見於T-ALL

t（10；14）——HOX-11-TCRα，常見於B-ALL

t（10，11）——CALM-AF10，常見於AML-M0、M4

t（11，19）——HRX-ENL，常見於AML-M4、M5；ALL

t（6，9）——DEK-CAN，常見於AML-M2

t（1，14）——TAL1-TCRδ，常見於T-ALL

t（8，21）——AML1-ETO，常見於AML-M2*；前B-ALL

inv（16）——CBFβ-MYHⅡ，常見於AML-M4EO*

t（3，5）——NPM-MLF1，常見於AML-M6

（帶*者常提示預後較好）

二、臨床意義

分子生物學檢查對白血病診斷及分型有以下幾方面意義。

1．補充MIC檢查的不足細胞遺傳學是從染色體水平來檢查的，而分子生物學檢查是從基因、分子水平著手。有時染色體檢查結果不能肯定，或不能發現基因異常，往往可以通過分子生物學檢查予以明確。如t（9；22）的BCR-ABL融合基因，t（1；14）（p32；q11）的TAL-1-TCRδ融合基因，t（10；14）（q24；q11）的HOX-11-TCRα融合基因等。染色體檢查可以陰性，用PCR法可以檢測到有關的融合基因。

2．發現新的亞型例如AML-M3有4種亞型，其中t（11；17）（q23；q11），t（11；17）（q13；q11）的MIC檢查結果十分相似，無法區別，但所累及的融合基因，分別為PLZF-RARα及NUMA-RARα，只有依靠分子生物學方法檢查才能鑒別。前者對維A酸治療無反應，而後者在體外對ATRα敏感。

3．為研究白血病的發病機制打下基礎因為只有從基因水平進行研究，才有可能闡明白血病的發病機制。例如AML-M2融合基因，AML1-ETO基因可抑制共轉錄激活複合物（內含去乙醯化酶），可引起粒細胞分化障礙而造成白血病。抑制去乙醯化酶使組蛋白乙醯化，可使白血病細胞恢復分化而成熟。臨床上應用G-CSF（促進分化）和苯乙酸（抑制去乙醯化酶）治療已有成功的例子。

應用PCR、原位雜交等技術，可以在細胞水平研究某一基因的表達，如Bcl-2、P53、WT-1、多葯耐葯、肺耐葯蛋白基因等。已證明，表達多葯耐葯基因，肺耐葯蛋白Bcl-2、WT-1基因的急性白血病對化療的療效較差，緩解率較低，預後差。因此隨著方法學的改進和簡化，費用的降低，檢測這些基因有可能被納入白血病的分型，擴大MICM的分型，發展成為MICMG（形態、免疫、表型、細胞遺傳學、分子生物學、特殊基因表達）分型，除診斷外，對白血病的預後，指導治療將起重要作用。

三、注意事項

1、標本採集和運送過程中應嚴格注意避免溶血、凝血。

2、標本保存：存放於4～10℃冰盒中，可保留24小時，建議儘快送檢。

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