醫學服務團隊：細胞培養方法之流式細胞術檢測細胞周期

平板克隆實驗

一、實驗方法

1．用6孔板培養細胞，待細胞生長達到60%-70%，根據實驗需求處理，繼續培養；

2．根據實驗細胞處理後，把細胞吸出至1.5ml離心管內，200g 離心5min；

3．用 PBS 洗滌細胞2次，200g離心5min，收集1-5×105 細胞；

4．細胞固定：加入1ml冰浴預冷70%乙醇中，輕輕吹打混勻，4℃固定2h或更長時間。固定12-24 h可能效果更佳。200g左右離心3-5min，沉澱細胞。加入約1ml冰浴預冷的PBS，重懸細胞。再次離心沉澱細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。 注意：70%乙醇在使用前需進行預冷處理

5．碘化丙啶染色液的配製：參考下表，根據待檢測樣品的數量配製適量的碘化丙啶染色液：

6．染色：每管細胞樣品中加入0.5 ml碘化丙啶染色液，緩慢並充分重懸細胞沉澱，37℃避光溫浴30min。隨後可以4℃或冰浴避光存放。染色完成後宜在24h內完成流式檢測。

7．流式檢測：用流式細胞儀在激發波長488nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。

二、結果示例及分析

細胞培養方法之流式細胞術檢測細胞周期

圖片解析：

G1期(gap1)，指從有絲分裂完成到期DNA複製之前的間隙時間；

G2期(gap2)，指DNA複製完成到有絲分裂開始之前的一段時間；

S期(synthesis phase)，指DNA複製的時期。

圖中第一個峰為G1期，第二個峰為S期，第三個峰為G2期

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