分子篩，你今天保養了嗎

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有人說，一入豪車深似海，因為豪車重點還不僅僅在於購買價格高，後面的保養更是要花費諸多的金錢和諸多的心血。與豪車相似，分子篩（SEC）無疑是眾多層析方法中最嬌貴的存在。要想獲得滿意的實驗結果，一個高分辨高性能的柱子是必不可少的。剛接觸層析的小夥伴們，接過這嬌貴的柱子，是否不覺有種心跳加速，無從下手的感覺？這麼嬌貴的柱子，要怎麼維護？不用擔心，讓我們一起了解學習一下吧！

首次使用建議

在連接層析柱前，請務必務必務必確認流路中沒有空氣！一般柱子都是保存在20%乙醇溶液中，以避免微生物的繁殖，但是20%乙醇的粘度高於水溶液，因此，需要降低流速以避免柱床被壓縮。

將柱子連接至系統，並確保連接時柱子前端的流路中沒有氣泡

使用緩衝液置換柱子內的酒精時，請使用低流速；

如果需要，請測試柱子的耐壓參數（increase系列）；

柱效也是對於分子篩（SEC）來說非常重要的一個參數，對於柱效我們應該怎麼做呢？

測柱效是一個快速檢測柱子與儀器性能的方法。或許你會問，我們一直在說柱子，為什麼會提到了儀器？其實儀器管道的粗細、死體積的大小都會對柱效的結果有所影響，因此，評價一根柱子性能的變化，需要在相同的儀器相同的實驗條件下進行。一般我們可以採用1%體積的1%丙酮在280nm吸收檢測，具體的操作在每根柱子的說明書中有詳細的介紹。另外?KTA儀器也能通過峰積分快速計算得到結果。

分子篩實驗過程中的注意事項

1

低溫操作

為了保護蛋白的穩定性，很多小夥伴們都會選擇在低溫下進行層析。那麼必須提醒一下，溶液在低溫時，粘稠度會增加，所以一定要降低流速。除此之外，還需要注意的是，請確保所有溶液與柱子的溫度保持一致，以避免因為溫度的改變而引入氣泡。

2

樣品製備

好的樣品是實驗成功的第一步。對於分子篩，所有的樣品必須通過0.22μm濾膜過濾（或者10,000g離心10分鐘取上清）避免顆粒物堵塞柱子。另外，需要確保實驗過程中，pH、溫度等條件下，樣品不會變性或聚集沉澱。如果需要使用助溶的試劑（例如去污劑），請確保實驗過程中的樣品、溶液中同時添加。

3

緩衝溶液

分子篩屬於非吸附式層析，只需要一種緩衝溶液，具有非常好的兼容性，基本上我們只需要考慮蛋白的穩定性來選擇合適的緩衝液。一般我們在實驗中會加入150-300mM的NaCl，以降低非特異的吸附。使用不同的溶液的時候，因為溶液本身粘稠度的不同，請適當降低流速以保護柱子。

4

常規清洗

定期的清洗能夠延長柱子的使用壽命，維持好的解析度。清洗的頻率與樣品和對解析度的要求等實際情況相關。通常，如果發現柱子頂端有顏色的改變，或者柱子的背壓增高，解析度下降等，那就提示我們需要及時對柱子進行清洗了。對於Superdex和Superose系列的柱子，一般都建議反向的清洗，Hiprep Sephacryl系列柱子則一般採用正向清洗。最常規的清洗方式是採用1個柱體積的0.5M NaOH（Superdex 和Superose系列）或者0.2M NaOH（Sephacryl系列），並馬上用2個柱體積的水和2個柱體積的緩衝液平衡，切勿長時間的將柱子保存在NaOH溶液中。

如果常規清洗仍無法達到理想的效果，可以根據殘留物的不同選擇其它的清洗方式：例如：0.5M 醋酸溶液，1M NaoH，8M尿素或者6M 鹽酸胍（針對蛋白沉澱），30%異丙醇（對於脂類或者疏水物質），再者還可以考慮使用胃蛋白酶（1mg/ml溶於0.1M醋酸、0.5MNaCl中）消化，再使用NaOH清洗。

5

保存

如果超過2天不使用層析柱，建議使用2倍柱體積的水沖洗柱子後再使用2倍柱體積的20%乙醇沖洗柱子保存。（Hiload Superdex 30pg與Hiload Superdex 75pg建議在20%乙醇中加入0.2M NaAc，以保持pH的穩定）。再次強調，20%乙醇的粘度比較高，請注意降低流速。如果長期保存或者需要運輸，請鏈接保護裝置以避免因為環境的改變而引入的氣泡。

其實，分子篩的使用並不複雜，只要膽大心細，認真耐心，一定能獲得好的實驗結果~

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