對照實驗也是一門學問

師弟今天又被導師罵了！今天的組會上（對，你沒看錯，就是周末開組會），師弟的WB中目的蛋白沒出陽性結果，一片空白！但這並不是導師發火的原因。師弟的報告中沒有做GAPDH的對照，這也不是老闆發火的原因，真正的原因是師弟覺得GAPDH對照做了那麼多次了，沒問題的，減少點工作量，偷了懶，還說得很在理。

如果師弟有陽性結果，一切都OK，但結果是陰性的，導師其實很難判斷某些科學問題的，是認為結果就是這樣，認了？還是懷疑是學生的操作是否有問題？老闆不發火才怪呢！

這種實驗操作的偷懶行為在實驗室中還是挺常見的。

陰性對照、陽性對照GAPDH

為什麼要做對照實驗呢？

比如，你想知道「煮沸」這個操作是否能夠延緩牛肉腐敗的時間。如果你僅僅是煮沸了一塊牛肉，發現3天牛肉沒變臭，你並不能說是「煮沸」而不是這塊牛肉本身就不容易腐敗，造成了牛肉3天沒有變臭。這個時候你拿出另外一塊牛肉，沒有煮沸，而是直接放在一邊觀察它的腐敗過程。你發現這塊牛肉2天就變臭了，通過對比，你發現煮沸使牛肉的腐敗過程延緩了1天，這時候你才能下結論。

以前課本上寫了很多名詞，陰性對照、空白對照、陽性對照、實驗組、對照組、控制組，看之前本來還知道對照實驗啥意思，結果一看，反而都不懂了，傻傻分不清楚啊！

1.在生物對比實驗中，只有一個變數。在這個變數中，接近現實生活的叫對照組，而偏離現實生活的叫實驗組(experimental group)。例如你敲掉了某個蛋白，做WB實驗，GAPDH組是對照組，而你要驗證你的細胞中某蛋白是否被敲掉，這個是實驗組。

2.空白組是指不給予任何處理的對照，這在動物實驗以及實驗室方法研究中常採用以評定測量方法的準確度以及觀察實驗是否處於正常狀態。

臨床上的空白對照(No-treatment Control)臨床試驗中選定的對照組並未加以任何對照藥物,稱為空白對照。

而陰性對照和空白對照不同，陰性對照可採用安慰劑。

3.控制組（control group）是指不接受實驗處理的被試組。控制組和對照組的概念是比較類似的，在咱們的科研中基本上認為他倆就是同一概念。

一個實驗設計中，一般不會區別對照組、空白組及控制組，可根據你的實驗目的做出合理的對照組安排，需要時會加入空白組。控制組往往會與對照組或空白組相似，所以不需要嚴格區分定義，能滿足實驗目的並能得出可信結論就行。

一隻老鼠一生最大的悲哀，估計就是，上手術台前才發現自己只是對照組。

陰性對照、陽性對照、空白對照

陰性對照（negative control）和陽性對照（positive control）是針對「預期結果」而說的。凡是肯定出現預期結果的組，為陽性對照組。凡是肯定不會出現預期結果的組，為陰性對照組。

空白對照（blank control）是針對「處理因素」而說的。凡是不加處理因素的組，為空白對照組。所謂不加處理因素，可以是用生理鹽水等溶劑代替所要加的溶液，也可以是給實驗動物開刀但是不摘除某個器官，等等。

陰性對照和空白對照不一定能畫等號。兩者的區別在於，空白對照沒加處理因素，陰性對照加的是別種處理因素。

陰性對照的目的是排除假陽性，陰性對照就是一個確定肯定已知是陰性的東西，如果結果出來這個樣本顯示陽性了，說明你的實驗有問題，陽性對照的目的是排除假陰性。

陽性對照就是一個確定肯定已知是陽性的東西，如果結果出來這個樣本測不出陽性反應，說明你的實驗有問題。空白有的時候可以當作是一種陰性對照，空白的特別意義在於測定實驗的背景雜訊。也就是說空白樣本被測得到的數值，告訴你未知樣本的讀數當中，有多少數值是背景，多少是真實特異性的反應所得。

例如，我要做一個TGF-β的ELISA檢測實驗，我都做了哪幾個孔呢？空白孔(啥都沒加)、陰性對照孔(0孔)、實驗組（樣本）、陽性對照孔（標準曲線孔）。

咱們在文獻中經常看到一些其他的名詞，比如正常對照Normal Control，這是陰性對照的意思，還有一些做mRNA敲除或者lncRNA敲除實驗中對照會用mock、scramble等字眼，這裡面指的是你所使用的siRNA或者shRNA的載體，如果是空載體作為對照就稱之為mock，而如果把siRNA、shRNA序列打亂作為對照就是scramble對照組，兩者最好都做一下，這樣比較嚴謹。

"The scramble sequences mean the nucleotides are randomly added with no any target sequence tracks. In different lab, people make different scramble sequences as negative controls in their experiments."

我最後給師弟出了個餿主意：你那麼實在，你在報告里放一個以前做過的GAPDH的對照圖片不就行了嘛，笨！

References：

1. What Is a Control Group?Anne Marie Helmenstine. June 29, 2017

2. What Is the Difference Between a Control Variable and Control Group?Anne Marie Helmenstine

3. What Is the Difference Between Control Group and Experimental Group?Todd Helmenstine. April 24, 2017

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