高爾基體細胞器功能的實驗設計

Rothman和Orci曾用無細胞蛋白質合成系統進行了下列實驗，他們的實驗思路如下：

A．實驗中他們通過化學誘變得到一個中國倉鼠卵巢細胞(CHO)的突變體,該突變體是N-乙醯葡萄糖胺基轉移酶的缺陷突變體。在正常細胞中，該酶存在於高爾基體的中間瀦泡中，可將UDP-N-乙醯葡萄糖胺中的N-乙醯葡萄糖胺轉移到糖蛋白的甘露糖上。

B．實驗中的第二個材料是水泡性口炎病毒（VSV),該病毒能夠編碼一種膜整合的糖蛋白（VSV-G)。

C．實驗手段是用VSV感染N-乙醯葡萄糖胺基轉移酶的缺陷突變體和野生型的CHO細胞，以野生型未感染病毒的CHO細胞為對照。然後分離高爾基體進行生化分析。

根據上述材料和你所學的細胞生物學知識回答下列問題：

1．高爾基體的標誌性酶是什麼？

2．在對野生型未感染病毒的CHO細胞的高爾基體進行生化分析時能否檢測到膜整合的糖蛋白（VSV-G)？ 為什麼？

3．VSV感染N-乙醯葡萄糖胺基轉移酶突變的的CHO細胞，對該細胞的高爾基體進行生化分析時能否檢測到糖蛋白（VSV-G)？ 該糖蛋白是否進行了糖基化修飾，為什麼？

4．如果用VSV感染野生型的CHO細胞，對該細胞的高爾基體進行生化分析時能否檢測到糖蛋白（VSV-G)？ 你預測該糖蛋白上是否具有N-乙醯葡萄糖胺？為什麼？

要點分析：

1．高爾基體的標誌性酶為糖基轉移酶；

2．膜整合糖蛋白(VSV-G)是病毒所產生，由於野生型CHO細胞未感染病毒，因此，對未感染病毒的CHO細胞的高爾基體進行生化分析時不能檢測到膜整合糖蛋白(VSV-G)；

3．能檢測到膜整合糖蛋白(VSV-G)，但由於N-乙醯葡萄糖胺基轉移酶突變，改糖蛋白不能進行糖基化修飾；

4．能檢測到膜整合糖蛋白(VSV-G)，野生型CHO細胞有功能的N-乙醯葡萄糖胺基轉移酶發生了催化，引起糖蛋白髮生糖基化修飾。

題目不難，但要動腦筋思考。

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