體外診斷之你可能不知道的側向層析技術熱點！

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側向層析技術是20世紀90年代在單克隆抗體技術、膠體金免疫層析技術和新材料技術基礎上發展起來的一項新型體外診斷技術。具有快速、簡便、單人份檢測、經濟的優點（圖1）。現已廣泛應用於醫學檢測、食品質量監測、環境監測、農業和畜牧業、出入境檢驗檢疫、法醫定案等領域。

圖1：免疫層析試紙條

側向層析技術以大孔徑的微孔濾膜（NC膜、硝酸纖維素膜）為載體，將特異性的抗原或抗體固定在NC膜上，當待測樣品加到試紙條一端的樣品墊上後，通過毛細作用側向移動，與結合墊上的膠體金或微球標記的試劑發生特異的免疫反應，再移動到NC膜上，被固定在NC膜表面的抗原或抗體捕獲，聚集在檢測帶上，通過目測硝酸纖維素表面標記物（膠體金或乳膠顆粒）的光反射信號的密度得到直觀的顯色結果。其它未結合的標記物則越過檢測帶，流入吸水墊中，達到自動分離的目的（圖2）。

圖2 免疫層析試紙條的結構

微球定量側向層析

隨著免疫檢測技術的飛速發展，定量、高靈敏度、多元檢測、系統集成化，開始成為IVD領域新的研究方向熱點，與傳統的ELISA和膠體金定性側向層析檢測相比，基於微球的定量側向層析檢測具有穩定性好，線性範圍寬，靈敏度高等諸多優點。

製備Estapor納米微球的常用材質為聚苯乙烯（PS）或者聚苯乙烯與其他化合物如二乙烯苯組成的複合材料。

對於微球表面無任何功能基團修飾的微球，抗原或抗體通過被動吸附作用固定在微球表面，工藝簡單。

對於有功能基團修飾的微球，抗原/抗體可通過共價交聯的方式固定在微球表面。

抗原/抗體的共價交聯方法主要有兩種：

一種是兩步法，交聯前微球需先激活，例如-COOH羧基修飾的微球可用NHS/EDC活化；

另一種是一步法，微球交聯前只需更換緩衝液的pH值即可活化，操作十分方便，如氯甲基、甲苯磺醯基、環氧基修飾的微球就屬於此類。

抗原或抗體偶聯到微球表面後可通過離心、透析或者超濾去除未交聯的抗體/抗原 ，然後再使用超聲重新分散。

微球是定量側向層析檢測的核心原料，對定量層析產品的性能有重要的影響。Micheal Mansfield 博士將於10月19日在2017默克生命科學體外診斷技術國際研討會和體外診斷行業研究者進行分享。

Mansfield博士

圖片丨Mansfield博士

Mansfield博士在馬薩諸塞州貝德福德MilliporeSigma至今已工作了28年，目前是Biosystems和Regulated Materials研發部的應用開發科學家。他最初專註於W、S和N印跡中生物分子與膜表面相互作用的研究，後來致力於使用離心過濾裝置處理樣品以及濃縮蛋白質溶液的研究。在過去的18年中，他一直致力於研究在免疫診斷和醫療器械領域膜和其他多孔材料的應用。

會議安排

2017默克生命科學體外診斷技術國際研討會

會議地點：上海喜瑪拉雅酒店

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