石蠟切片與冰凍切片，組織學中的兩個性格迥異的好兄弟

石蠟切片和冰凍切片是組織學中最常用的兩種切片方式。顧名思義，本質上的不同就是將組織固化的方式不同：一種是用石蠟固化；另一種是用冰凍的方法（這個和羊肉卷的製作方式有些類似）。兩者各有優缺點，在實驗的應用上，石蠟切片常應用於IHC（免疫組化）實驗，冰凍切片常應用於IF（免疫熒光）實驗。他們相同的是應用的免疫學基本原理，即抗原與抗體特異性結合的原理。

下面詳細介紹兩種方法的異同點：

一、石蠟切片

石蠟切片技術是常規製片裡面應用最廣泛的方法。一般組織從取材固定再到製片成標本需要數天的時間，但是標本是可以長期保存的，屬於一種永久性顯微玻片技術。

1.固定：將新鮮組織切成小塊，固定於4%多聚甲醛過夜。

2脫水：為了減少組織材料的急劇收縮，應使用從低濃度到高濃度遞增的順序進行經70%、85%、95%直至純酒精（無水乙醇），每次時間為1小時。

3透明:常用的透明劑有二甲苯，二甲苯是石蠟的溶劑。此步最好在通風廚進行。

4浸蠟:先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1小時。

先後移入2個熔化的石蠟液中浸漬1小時左右。

5包埋：以少許熱蠟液將其底部迅速貼附於包埋盒內上，然後置於速凍台，讓石蠟固定。

6切片：切片刀的銳利與否、蠟塊硬度是否適當都直接影響切片質量，可將蠟塊至於冷水中改變蠟塊硬度。通常切片厚度為5微米，用毛筆輕托輕放在37度水浴中展片。

7貼片與烤片：

將水浴中展片撈至玻片上鋪正，然後將載玻片放入37℃溫箱中乾燥。

二.冰凍切片

相比於石蠟切片-冰凍切片優點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構，可能會使抗原彌散。因其製作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應用於手術中的快速病理診斷。

冷凍切片機

冰凍切片相比較於石蠟切片簡單易行，一般進行固定脫水後，固定於包埋劑就可以在冰凍切片機進行切片。有些新鮮標本可以直接取材後，冷凍托塗包埋劑後置於冷凍托上速凍，凍好後立即切片。

冰凍切片最重要的是防止樣品中冰晶的出現，一般可以通過速凍的方法使組織溫度驟降，減少樣品內冰晶的形成。也可以將組織置於20％～30％蔗糖溶液1～3天，利用高滲吸收組織中水分，減少組織含水量。

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