動物樣品的取樣與保存方法大放送
在微生物測序中，樣本的準備是獲得高質量DNA的前提，而樣本準備也正是讓眾多微生物科研工作者感到困擾的重要一步。
今天就讓小編向您介紹介紹糞便、腸道內容物、腸道黏膜的取樣與保存方式。
一、糞便樣品採集
1、人糞便樣本採集
1）準備好無菌的便盆和糞便容器，洗手，帶上手套收集新鮮的糞便樣本；
2）在實驗室將裝好受試者糞便樣本，立即放在冰上進行分裝並標記；
3）用無菌牙籤或糞便取樣器截取樣品中段里部（糞便表層含有腸粘膜脫落細胞），外部容易污染，且接觸空氣後，部分細菌 DNA 開始降解；
4）用滅菌離心管每管稱取0.5g左右糞便樣本，每個樣本取多管備份，推薦10管；
5）分裝好後，若當天提取DNA，可以先放4 ℃ ，長期存放需先迅速放入液氮中，之後立即放入-80℃保存。
6）每次實驗使用一管，未用完丟棄。
註：如糞便樣品量較多或不能馬上收集，最遲要在2小時之內全部收集完。
另附：人類微生物組計劃（HMP）和國際人類微生物組標準（IHMS）的取樣方法
1、準備所需器材
2、貼標籤，標註信息
將標籤紙貼在帶勺糞便採集管（若糞便採集管自帶標籤可不用再貼）及自封袋上。在所有標籤上註明取樣對象信息（姓名、樣本編號、樣本類型、取樣時間等）。
溫馨tips：用透明膠帶在糞便採集管標籤上至少纏繞一圈，並在管蓋上標識名稱，更加保險。
3、收集糞便樣品
將糞便樣本收集系統置於馬桶上，放下馬桶座圈，排便，再將手洗乾淨。
溫馨tips：盡量在收集糞便樣本前將尿液排盡，再將手洗乾淨。
4、取樣
將糞便樣本收集系統的盒子拿出，用勺子截取糞便中段內部一勺（約1g，勺子不要裝得過分滿）
5、裝樣
將勺子垂直放入糞便採集管，擰緊蓋子。
6、重複取樣
一式三份，重複步驟4~5；
7、寄送樣品
將糞便採集管放入自封袋中，液氮速凍後-80 ℃保藏或直接置於乾冰上運輸。
2、小鼠糞便樣本採集
1）將待取樣的小鼠放進乾淨的鋪有消毒濾紙的籠子里，小鼠排便後立即收集糞便樣本。不同的小鼠取樣要更換新的濾紙；
2）單個小鼠用滅菌離心管稱取0.2g樣本，分裝好後立即放入-80℃保存；
3）單個小鼠糞便樣本不滿足0.2g，根據課題需求，可以將多個小鼠糞便樣本混合為一個樣品；
4）樣本珍貴，需進行備份。
二、腸道內容物樣品採集與提取
1）在實驗對象死亡後，用無菌解剖刀，在無菌狀態下取出整個腸道，切取所需腸段的內容物（條件允許的話，可在無菌操作台進行）；
2）用無菌手術刀挖取內容物，立即放在冰上進行分裝並標記（建議使用乾冰運回實驗室）；
3）立即進行DNA抽提。如果不能立即抽提，建議將樣本先置於液氮中冷凍4小時以上，再轉移到-80℃保存；
4）單個樣本取樣量：大型動物，如牛、羊500 mg-1000mg/管；中型動物，如大鼠、家兔 200-1000mg/管；小型動物，如小鼠 200-500 mg/管；對於腸道內容物較少動物，如魚、蝦 ≥100 mg/管。為保證實驗順利進行，在採樣允許的情況下，盡量多採集樣品。
推薦試劑盒：QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit 或 OMEGA E.Z.N.A. Stool DNA Ki
三、腸道黏膜採集與提取
1）在無菌環境中將整個腸道移出體外；
2）取不同部位腸段，然後在腸系膜的對面縱向切開，使腸腔外露；
3）用無菌取樣器對內容物進行取樣、保存；
4）將腸道內容物清理乾淨後，用無菌生理鹽水輕輕清洗腸腔，清除看得見的腸容物（避免擾亂腸粘膜）；
5）用無菌載玻片輕刮腸道粘膜（避免穿透基底膜）。所有樣品取完後立即放入液氮冷凍，並放在-80℃保存。
推薦試劑盒：MP BIO FASTDNA SPIN Kit for Soil (MP Bio, Santa Ana, CA)
實驗部林愛強 文案
市場部潘旭蘭 編輯
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