關於高通量測序RNA樣品製備，你要知道的那些事

高通量測序樣品準備工作非常重要，若樣品遭到破壞，就很難得到完美的測序結果。上次我們給大家匯總了DNA樣品製備的內容，今天來看看RNA樣品製備需要注意哪些事項呢？

1.樣品選取

與DNA樣品製備不同的是，由於不同發育階段下不同組織部位中的轉錄本及基因表達存在差別，因此在選取樣品時要根據實驗目的選取材料。

植物組織

根據實驗目的選取需要研究的組織部位，優先選取幼嫩組織。取樣後用無菌水沖洗，並用吸水紙吸干樣品表面液體，迅速投入液氮中，-80°C保存，使用乾冰運輸。由於RNA較DNA易降解，因此操作要儘快。組織塊不宜太大，易凍存，便於研磨及提取。

動物組織

組織離體後在冰上分割成1~5mm的小塊組織，操作要迅速，並儘可能在冰上進行。動物組織樣品可選擇液氮凍存或RNAlater保存，置於-80°C保存，使用乾冰運輸。使用RNAlater保存時務必保證組織被充分浸潤。易降解的組織、臨床腫瘤樣本或在野外採樣不易攜帶液氮時，優先選擇RNAlater保存。

血液樣品

分離好的血細胞建議使用20倍體積TRIzol LS充分裂解後-80°C保存，使用乾冰運輸；全血樣品建議使用3倍體積TRIzol充分裂解後寄送。血液樣品中RNA極易降解，反覆凍融會造成紅細胞破裂加速降解，因此樣品製備時不建議直接凍存。

細菌/真菌樣品

取5mL以上對數生長期菌液離心，收集菌體後在3min內液氮速凍，乾冰運輸。菌類樣品不建議保存於TRIzol裂解液或RNAlater中。

2.提取方法

3.樣品取樣量說明

註：利用PacBio測序技術進行的全長轉錄組，其核酸需求量為普通轉錄組的2~3倍，因此組織樣品量需適當增加。

4.核酸樣品量

5.樣品包裝及注意事項

樣品包裝及送樣注意事項可以參考DNA樣品製備。

1.不要用紗布（樣本易粘附在紗布上）、紙張（低溫凍存易碎）直接包裹樣本，而是用鋁箔或進口凍存管包裝。

2. 在包裹樣本的鋁箔或進口凍存管表面，用油性記號筆標明樣本編號等信息，並且不要與乙醇等有機溶劑接觸。

3.不要用玻璃容器或密封性不好的容器在液氮中保存樣本（玻璃器皿或密封性不好的容器從液氮中取出後會發生爆炸）；樣本包裝中不要使用透明膠帶（膠帶在低溫條件下粘性減弱，易掉落）。

4.不要把標籤紙或其他紙制的說明性文件放入樣本袋內，因為紙張在液氮中易碎。

5.不要在一隻樣本袋中放過多的樣本，以防無法放入液氮罐或無法從液氮罐中取出。

6.客戶在填寫《樣本信息單》時應當詳細描述樣本的類型、處理方法、儲存條件、儲存時間以及需要進行的檢測類型等相關細節，以便技術人員確定合理的樣本抽提或處理方案。

7.乾冰使用量：24小時到達的，乾冰數量不得低於5公斤；大於24小時到達的，建議保證每天3公斤的乾冰數量。夏季可以適當再多增加部分乾冰（平時的 1.5 倍）。

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