轉基因,都是怎麼轉的?
轉基因是指將外源分子如 DNA、RNA 等導入動物細胞、植物細胞、細菌、真菌等的技術。基因導入是動植物基因工程研究中的關鍵環節之一,隨著各項技術的推進,先後出現了化學介導、生物介導和物理介導等類型方法。
主要包括:脂質體轉染法、多種陽離子物質介導、電穿孔法、顯微注射、基因槍、病毒介導的轉染等。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉基因已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。
Bio-Rad 可提供三種轉基因的方案,下表可以根據不同的細胞類型,選擇不同的轉基因產品。
脂質轉染
Bio-Rad 提供一系列脂質轉染試劑,可有效地將核酸導入到各種經培養的哺乳動物細胞系中,包括那些難以轉染的細胞, 每種脂質均適用於特定的應用。
siLentFect 脂質試劑是適合 siRNA 遞送的特定於 RNAi 的脂質。它還可用於共轉染小型報告基因質粒和 siRNA 分子。TransFectin 脂質試劑是適合在範圍廣泛的細胞系中傳遞質粒的通用脂質。細胞系特定的脂質試劑 COSFectin 和 HEKFectin 最適合於使用指定細胞系的試驗,對於蛋白質過表達和病毒產生尤其有價值。
轉染效果
使用 TransFectin 脂質試劑高效轉染原代神經細胞
TransFectin 脂質試劑演示主要鼠海馬神經元的溫和而有效的轉染。
使用 siLentFect 脂質試劑,利用以熒游標記的 siLentMer nonsilencing siRNA 轉染 NIH-3T3 細胞
電穿孔
電穿孔(Electroporation)也叫電轉染,是通過高強度的電場作用,瞬時提高細胞膜的通透性,從而吸收周圍介質中的外源分子。這種技術可以將核苷酸、DNA 與 RNA、蛋白、糖類、染料及病毒顆粒等導入原核和真核細胞內。電轉化相對其它物理和化學轉化方法,是一種有價值和有效的替代方法。電穿孔是功能強大的將核酸、蛋白及其它分子導入多種細胞的高效技術。
Bio-Rad 共有兩套電穿孔系統,Gene Pulser Xcell 系統和 MicroPulser 系統。
預設程序:
基因槍
基因槍技術,又被稱為生物彈道技術(Biolistic Technology)或微粒轟擊技術(Particle Bombardment Technology),是 用火藥爆炸或者高壓氣體加速將包裹了 DNA 的球狀金粉直接送入完整的組織或者細胞中的一種技術。它是轉基因技術中的一種方法,其基本原理就是採用一種微粒加速裝置,使裹著外源基因的微米級的金(比重大,而且化學性質很穩定)顆粒獲得足夠的動量打入動植物細胞或組織以及活體動物中。
Bio-Rad 提供 2 種基因槍系統,手持式 Helios 基因槍和台式 PDS-1000/He 系統。
PDS-1000/He 系統推薦的實驗條件:
實驗方案庫
針對不同的動物細胞和植物細胞,在體內和體外不同條件下,Bio-Rad 網站上也有一系列電穿孔和基因槍的具體實驗方案,都是經文獻驗證的。
電穿孔方案庫
基因槍方案庫
TransFectin,siLentFect,COSFectin,HEKFectin,Gene Pulser Xcell,MicroPulser,Helios,PDS-1000/He是 Bio-Rad Laboratories, Inc. 在特定區域的商標。
文章來源:Bio-Rad
圖片來源:shutterstock 正版圖庫
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