有限複製流感疫苗研製取得進展

甲型流感病毒感染嚴重威脅全球公共健康並造成重大經濟損失，而疫苗仍是防控流感最有效的手段。干擾素敏感（IFN -sensitive）和複製缺陷（replication-incompetent）流感疫苗因其在正常細胞中無法進行有效複製，卻能夠誘導機體產生強烈的免疫反應而備受關注，這類疫苗被認為將很有可能替代傳統的滅活疫苗和減毒疫苗。非結構蛋白1（NS1）是甲型流感病毒的致病因子之一，在病毒的生命周期中發揮著多種重要作用，尤其是能夠通過抑制RIG-I介導的I型IFN的產生來拮抗宿主的天然免疫反應。IFN敏感疫苗正是利用這一理論依據，將流感病毒的IFN拮抗功能去除，從而抑制病毒在體內的有效複製。目前主要使用IFN-α/β缺陷的Vero細胞或IFN功能低下的低日齡SPF雞胚來繁殖此類疫苗病毒，但仍然無法滿足此類疫苗病毒的生產需求。

中國科學院微生物研究所劉文軍課題組長期從事流感病毒的複製調控機制研究，前期圍繞流感病毒NS1拮抗宿主抗病毒天然免疫反應的機制開展了系列研究工作（Journal of Virology,2016,90:6263– 6275；Cellular Microbiology,2017,19(2),e12643）。而該研究則利用NS1拮抗宿主抗病毒天然免疫的功能，製備了有限複製流感疫苗並建立了生產該類疫苗的細胞系。

該研究利用反向遺傳技術在RIG-I敲除的293T細胞中成功包裝出NS1蛋白38位和41位氨基酸雙突變（NS1 R38A/K41A）的重組流感病毒，其包裝效率要遠遠高於其在野生型293T細胞中的效率。並且，該重組病毒幾乎喪失了IFN拮抗功能，在MDCK、A549甚至IFN-α/β缺陷的Vero細胞中傳3-6代後即被細胞清除。為了能夠大量生產此類有限複製的IFN敏感流感病毒，該團隊利用Tet-On 3G系統建立了穩定表達野生型NS1蛋白的Vero細胞系，NS1 R38A/K41A病毒在該細胞繫上能夠穩定傳20代以上並保持較高的病毒滴度。動物實驗表明，NS1 R38A/K41A病毒能夠感染小鼠並誘導強烈的天然免疫和獲得性免疫，並抵抗A/WSN/33 (WSN)、A/Puerto Rico/8/1934 (PR8)和 A/California/04/2009 (CA04)流感病毒的再次攻擊，但NS1 R38A/K41A病毒的致病力幾乎喪失，並很快被排出體外。

綜上所述，RIG-I敲除的293T細胞有助於NS1 R38A/K41A流感病毒的包裝，穩定表達NS1的Vero細胞有助於NS1 R38A/K41A流感病毒的有效複製，該系統可以用於包裝並生產有限複製的IFN敏感疫苗病毒。NS1 R38A/K41A流感病毒在正常細胞和小鼠體內的複製是有限的，是一種潛在的安全有效的干擾素敏感疫苗。

上述研究於5月1日在線發表在Frontiers in Cellular and Infection Microbiology上，研究員劉文軍和副研究員孫蕾為文章通訊作者，博士生陳璨為第一作者。該研究得到國家重點研發計劃、國家自然科學基金及中科院B類先導科技專項等項目的資助。（來源：中科院微生物研究所）

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