關於液相色譜流動相PH，一文就夠了

PH調節的兩個作用

抑制離子化

01

在HPLC分析中，反相操作常常可以向含水的流動相中加入酸、鹼或者緩衝溶液，來保持流動相的PH值為一定的數值，從而抑制目標化合物的離子化。

這樣，可以減少色譜峰的拖尾、改善峰形，提高分離方法的選擇性。

比如，目標化合物為有機弱酸，可以向甲醇/水流動相中加入1%的甲酸（或者乙酸、三氯乙酸、磷酸等），可以抑制有機弱酸的離子化，從而獲得對稱的峰形。

當目標化合物為弱鹼性樣品的時候，則向流動相中加入1%的三乙胺，也可以獲得對稱性高的色譜峰。

調節離子強度

02

同時，在反相色譜法中，分析容易解離的鹼性有機物時，隨著流動相PH值的增加，色譜柱填料鍵合相表面殘存的硅羥基與目標化合物的陰離子親和力增強，往往會引起色譜峰拖尾並干擾後面化合物的基線分離。

這時候，向流動相中加入0.1-1%的乙酸鹽或硫酸鹽、硼酸鹽，就可以利用鹽效應減小硅羥基的干擾，抑制拖尾，改善目標物的分離。

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兩大類PH值調節劑

無緩衝能力

01

常見的小分子的酸和鹼，比如HCl和NaOH等，只能調節流動相的PH值，但是能使流動相具備PH值的緩衝能力，一旦流動相混入別的PH值溶液，PH很容易波動。

帶緩衝能力

02

主要是指弱酸及其鹽、弱鹼及其鹽，他們可以起到一定的PH緩衝作用，從而保持流動相的PH值的穩定性。

常見的用作調節色譜分析流動相PH值的化合物主要有一下幾類：

酸類

甲酸 - 濃度在1%以下就可以使純水的PH值達到2.0左右；

乙酸 - 強度弱於甲酸，使用濃度不超過5%；

三氟乙酸 - 酸性較強，有很大的離子強度和一定的離子對作用，分析蛋白質和多肽時常用；

（ 以上者三種酸在低於215nm波長時候不能使用，有強烈的紫外吸收，甲酸和乙酸的揮發性也比較強，放置時間久了，濃度會變化。）

磷酸 - 不揮發性酸，離子強度高，低波長無紫外吸收，但不能用於質譜分析，對色譜柱壽命有較大影響。

鹼類

主要是氨水和三乙胺，鹼性比較強，注意濃度配置，以免損壞色譜柱填料造成色譜柱報廢。

鹽類

甲酸銨 - 可以用於LCMS分析，對色譜柱傷害比較小，只是離子強度較小，容易吸潮，易揮發。可以與甲酸混合使用，形成甲酸銨-甲酸緩衝體系，PH在3 - 4.5範圍。

乙酸銨 - 和甲酸銨類似，離子強度也不是很高，可以形成乙酸銨-乙酸緩衝體系。PH範圍在4 - 5.5。

磷酸的鉀鹽和鈉鹽 - 大多數情況可以互通使用，由於是多元酸鹽，緩衝體系較多，PH範圍也較廣，離子強度高，但是，不能用於LCMS分析，對色譜柱不利。

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