激光一直照著，為什麼沒有細胞通過時，流式細胞儀不會收集信號？

除了計數細胞外，流式還可以了解細胞的物理、化學或生物特性。流式細胞術檢測到細胞的主要物理特性，是利用它們衍射、反射和折射激光相干單色光的能力。當激光形成窄且聚焦的相干光遇到細胞（所謂的事件）時，其衍射強度與「事件」的大小成比例。流式細胞儀配備有光電二極體，用於收集激光束路徑中的細胞衍射產生的光，即前向散射光（FSC）。那麼這個時候可能就有FLOWER問了，如果這樣的話，沒有細胞通過的時候，激光也應該一直照著光電二極體，應該是源源不斷的產生信號才對，為什麼只有細胞通過時才會有反應呢？看下面這個圖：

圖中的紅點就是流式細胞儀配備的遮光板，正是此物，才使得沒細胞通過時，光電二極體不會收集到錯誤的光信號（上圖a）。只有當細胞通過時，光束會根據細胞的大小不同，成比例地擴大，FSC光電二極體可以收集到與細胞大小相關的光信號（上圖b）。

除了FSC檢測器以外，流式細胞儀還設置了其它光電二極體或光電倍增管（PMT）收集由細胞表面以及其內部的細胞器、囊泡、顆粒等反射的光，這類光與激光前進的方向呈一定角度，所以稱為側向散射光（SSC）信號，其強度與細胞的顆粒度成比例。因此，在血液樣本中，沒有細胞核的紅細胞將SSC非常小，而顆粒較多的的粒細胞SSC大，而如果只有液體而沒有細胞通過時，就更加不會出現SSC信號了。不過不同儀器SSC收集的角度會有所不同，甚至目前有些儀器在紫光通道也設置了SSC。至於熒光參數則更好解釋，沒有細胞通過，就不會存在結合的熒光素被激光照射，所以就更加不會檢測到熒光信號。最後，贈送大家一張目前最常見的一系列熒光素及其發射、激發光譜和使用的激光器：

參考文獻：Anna Porwit, Marie Christine Béné. Multiparameter Flow Cytometry in the Diagnosis of Hematologic Malignancies. Cambridge University Press, Jan 25, 2018

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