蛋白、抗體分離難？我猜你一定沒看過這個！Waters 新型反相色譜柱BioResolve

最新 07-19

蛋白、抗體分離好難呀！

來看看我們的方法吧！

在ADC藥物的質量控制標準中，最重要的就是建立載藥量（DAR）的分析方法，以IdeS酶解片段為檢測對象的方案，通過檢測含藥片段的相對比例對DAR值進行確定。按照常規的實驗經驗，採用了C4進行了方法優化，並對市面上的不同品牌進行了對比，相對滿意的結果如下所示：

這個方案中，大多數片段的分離結果還是比較滿意的，但是LC(1)及Fd』(1a)兩個載藥片段與相鄰峰沒有基線分離，而這會影響方法的穩定性（這很重要！），對於轉到QC是很不利的。於是我們使用了BioResolve這款新型反相色譜柱，最終的色譜圖變成了下面的風格：

從上圖可以看到，經過研發人員的優化，所有關鍵峰都得到了基線分離。而且特別方便的是，（敲黑板！！！）這個方法里用的是常規的乙腈-水體系，而不是其他廠家推薦的IPA三元流動相，大大節省了平台方法開發需要的時間。

那麼，究竟是什麼柱子有這麼神奇的分離效果呢？下面我們就來介紹一下。

BioResolveRP色譜柱的填料顆粒形態和鍵合方式經過專門設計，是為解決這些難題量身定製的，專為完整mAb及其亞基的LC或LC-MS分析而設計。BioResolve RP色譜柱的表面多孔顆粒和大孔徑(450 ?，壓汞法測定)可改善其分離生物大分子（如mAb）的動力學特性和分離性能，而創新的多苯鍵合相則賦予該色譜柱有利分析的解吸行為和獨特的選擇性，同時使其保留性與傳統RPLC色譜柱相當。此外，2.7μm硅基實心核顆粒產生的柱壓較低，因此靈活性更強，在產品的整個生命周期內可用於各種LC平台，而不會對性能產生不良影響。

特點

1.填充有硅膠實心核顆粒，顆粒表面為孔徑450 ?的塗層，在蛋白質分析中可實現無可比擬的分離度和優異的回收率，而且進樣之間殘留極低。

2.採用創新的多苯鍵合相鍵合技術（正在申請專利），在LC (0.1% TFA)和LC-MS（0.02% TFA或0.1% FA）應用中，對完整mAb及其亞基擁有卓越的分離性能。

3.在HPLC、UHPLC或UPLC儀器上的性能沒有差別。

4.使用mAb亞基標準品（即經過還原的IdeS酶解NIST mAb參比物質8671）進行了QC測試，可確保色譜柱之間的性能一致性。

下面來看看BioResolve RP色譜柱分離完整抗體的色譜圖。