中國農科院哈獸研仇華吉團隊建立現場快速檢測非洲豬瘟的方法

導 讀

近日，中國農科院哈爾濱獸醫研究所生物技術重點實驗室豬烈性傳染病團隊在非洲豬瘟研究方面取得重要進展，建立了交叉引物擴增結合免疫層析條(CPA-strip)快速檢測ASFV的方法。相關研究成果以「Cross-priming amplification combined with immunochromatographic stripfor rapid on-site detection of African swine fever virus」為題，發表在國際著名學術期刊Sensors and Actuators B: Chemical。通訊作者是團隊首席科學家仇華吉研究員，高瑤、孟星宇、張華偉並列文章第一作者。

研究背景

非洲豬瘟（African swine fever,ASF)是由非洲 豬瘟病毒（African swine fever virus,ASFV)引起豬 的一種烈性、高度接觸性傳染病,引起豬的死亡率可 高達100％，與傳統豬瘟相 似且綜合癥狀複雜難辨。ASFV屬非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒屬，是一種有囊膜的雙鏈 DNA病毒，也是唯 一的蟲媒DNA病毒。中國將非洲豬瘟列為一類動物疫病，世界動物衛生組織（OIE）將其列為必須報告的動物疫病。近年來，中國周邊國 家喬治亞、亞美尼亞、亞塞拜然、俄羅斯、烏克蘭等 國先後發生多起非洲豬瘟疫情。今年8月以來我國發生首例非洲豬瘟疫情以來，已相繼有12個省（直轄市）報道非洲豬瘟疫情，當前中國對非洲豬瘟 的防控形勢十分嚴峻，這就使得掌握 ASF的簡便、快速精確的現場診斷方法變得尤為重要。

截至2018年10月29日全球非洲豬瘟疫情

截至10月29日，全球有37個國家和地區向OIE報告發生非洲豬瘟疫情，其中13個國家已經根除。2018年新發生疫情的國家包括匈牙利（4月）、保加利亞（8月）、中國（8月）、比利時（9月）。

2018年以來，全球有波蘭、俄羅斯、拉脫維亞、捷克、羅馬尼亞、摩爾多瓦、烏克蘭、匈牙利、保加利亞、比利時、象牙海岸、南非、查德、尚比亞和中國等15個國家發生4183起非洲豬瘟疫情。

（來源：農業農村部、世界動物衛生組織）

結果速覽

本研究中，分析了ASFV毒株的p54基因序列，選擇高度保守的區域設計引物和探針，以確保所有基因型都能被檢測。生物素和FITC分別標記在特異引物的5』端作為探針，在CPA擴增之後，產物的兩端分別與FITC和生物素連接，然後通過嵌入在測試條、測試線以及對照線上的抗體進行鑒定，以指示檢測結果。CPA技術不需要專門的設備，反應時間也大大減少。試驗操作不需要專業的實驗室和人員，並且程序易於執行。採用該CPA方法檢測來自烏干達的臨床樣本時，與高靈敏度的實時PCR技術結果高度一致（44/45）。在CPA條帶中，只有一個樣品經實時PCR檢測陽性（CT值＝34），而CPA方法為陰性。綜上所述，建立的一種以P54基因為靶點與免疫層析試紙條（CPA條）相結合的ASFV CPA條帶檢測法特異性強、靈敏度高、簡便易行、成本低，對ASF有可靠的監測潛力。

ABSTRACT:African swine fever (ASF) is a highly contagious disease caused by African swine fever virus (ASFV) in domestic pigs and wild boars. Up to now, no commercial vaccines against ASF are available. With the rapid development of international trade and modern logistics and the frequent trade activities with Africa, Europe and neighboring countries, the risk of cross-border transmission of ASF to ASF-free regions is increasing. Therefore, there is an urgent need to establish a convenient and low-cost diagnostic method for rapid and on-site detection of the virus to timely implement the control measures. In this study, a cross-priming amplification in combination with immunochromatographic strip (CPA-strip) was established for rapid detection of ASFV. The CPA-strip assay displayed no cross-reactivity to other swine viruses. The minimum detection limit of this method was 200 copies. Forty-five clinical swine blood samples collected from Uganda were examined by the novel assay, 6 out of 45 samples were tested positive for ASFV. The agreement rate between the CPA-strip assay and the universal probe library-based real-time PCR was 97.8% (44/45). In addition, a total of 100 tissue samples and 57 blood samples from Chinese swine herds were tested to be negative. We concluded that the established CPA-strip method is

suitable for on-site detection of ASFV.

參考文獻：

1.Yao Gao, Xing-Yu Meng, Huawei Zhang, Yuzi Luo, Yuan Sun, Yongfeng Li, Muhammad Abid,Hua-Ji Qiu.Cross-priming amplification combined with immuno-chromatographic stripfor rapid on-site detection of African swine fever virus.Sensors and Actuators B: Chemical274(2018): 304-309| DOI: 10.1016/ j.snb.2018.07.164 |

2.http://www.moa.gov.cn/ztzl/fzzwfk/yqxx/201810/t20181029_6161807.htm

本期編輯：vetjamie

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